尊龙凯时人生就博的抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）主要包括以下步骤。

1. 包被步骤

首先，使用包被缓冲液配制1-10µg/ml的抗原溶液，现配现用。将100µl的抗原溶液加入高结合力ELISA板（货号80112）的每个孔中，覆盖上封板膜并在室温轻摇孵育2-6小时或在4°C过夜。随后，吸弃孔内的溶液，用洗涤缓冲液洗板2次，确保清洁。

2. 封闭步骤

接下来，使用封闭缓冲液母液配制的工作液，每个孔中加入300µl，室温轻摇孵育2-6小时或在4°C过夜。处理完毕后，吸弃封闭液并在吸水纸上拍干，板子可立即使用或密封保存于4°C备用。

3. 抗体效价检测

在抗体效价检测过程中，使用抗体稀释液对免疫前和免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100µl。覆盖上封板膜，在室温轻摇孵育30分钟。完成后吸弃液体，并用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300µl，确保充分洗涤以防止高背景）。

然后，使用抗体稀释液配制HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100µl。再次覆盖上封板膜，在室温轻摇孵育30分钟。最后，吸弃液体，洗板5次并拍干每个孔，随后加入100µl现成的TMB底物溶液，再次覆盖封板膜，在室温轻摇孵育至阳性孔出现蓝色（最长15分钟）。接着，每孔加入100µl终止液，蓝色会转变为黄色，最后在450nm波长下读取吸光度。

注意事项

此ELISA流程适用于对纯化抗原（包括蛋白质或多肽）所产生的抗体进行定性检测，并不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。同时，该流程默认一抗为兔源，若使用其他宿主动物需选用相应的二抗。

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