**293T细胞培养指南**

293T细胞，最初被称为293tsA1609neo，是一种通过将SV40T抗原的温度敏感基因插入293（HEK-293）细胞株而形成的高度转染细胞衍生株。

一、细胞基本信息

细胞名称：人胚肾细胞

细胞别名：Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo

种属来源：人

组织来源：肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S

传代比例：1:2~1:4，每2-3天换液一次

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳，温度：37℃

冻存条件：冻存液：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO；存储条件：液氮

安全性：建议在二级生物安全台内操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株的复苏（冻存管）

1. 将冻存管放入37℃水浴锅中迅速完全融化，并轻轻摇晃以促进融化。快速融化有助于提高细胞的复苏效果。

2. 在打开冻存管前，用75%酒精消毒其外壁。

3. 完全融化的细胞应直接离心，或转移至无菌的15ml或其它适用的无菌离心管中，400g离心5分钟，吸除上清，注意不要吸走细胞沉淀。然后用新鲜的完全培养液重悬，并转移至培养器皿，混匀后放入CO2培养箱中37℃培养。

4. 第二天检查细胞的贴壁或生长状态，并更换培养液。

2. 细胞株的复苏（T25瓶）

1. 对收到的T25瓶包装进行脱包，用75%酒精消毒瓶外壁。

2. 置于倒置显微镜下观察细胞状态，如无异常，使用移液器移去多余的培养液，并放置于CO2培养箱中37℃过夜培养。

3. 第二天视贴壁或生长状态，考虑进行换液或传代，传代比例参考1:2~1:4。

三、注意事项

1. 每支冻存管大约含有1×10⁶个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至一个T25瓶或一个6cm培养皿中。如果复苏后的存活率较低，可进行消化后转移至35cm培养皿或T125瓶中，以促进细胞更好地生长。

2. 若收到的产品经过常温运输，且培养瓶中充满完全培养液的贴壁细胞，请及时拍照记录是否有漏液或瓶身破损现象。用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态，先不打开瓶盖，静置在细胞培养箱中2~4小时以稳定细胞状态，然后取出，镜检并拍照记录细胞状态。

3. 如果细胞密度超过85%，请尽快进行传代操作。若悬浮细胞较多，请将培养瓶置于培养箱中静置过夜，以使悬浮细胞重新贴壁。如果收到的是常温运输的离心管中的悬浮细胞，可直接取出并转移至培养皿或培养瓶中。若培养液颜色正常则可保留原培养液继续培养，并在首次更换培养液时保留一半的原培养液，加入一半的新鲜培养液，以减少因培养液或血清差异引起的细胞生长不适应，确保细胞良好的生长状态。

4. 所有细胞培养操作均应在生物安全柜中进行，并严格遵循无菌操作规范。使用尊龙凯时人生就博品牌的细胞培养产品，以确保细胞培养的安全与高效。